[MILE米乐] 为生物医学领域提供了优化的实验解决方案。本实验以24孔培养板为例，进行目标细胞和工具细胞的感染预实验。可选择的工具细胞包括293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）或其他细胞。实验所需材料包括培养基、24孔培养板、移液枪、枪头、EP管、细胞计数板、冰盒以及废液缸等。根据具体的目标细胞情况，可选用Polybrene以提高感染效率。

第1天：细胞准备

将细胞培养至对数生长期，使用胰酶消化并计数后，测定细胞密度。每孔接种5×10⁴个细胞，并加入500µL细胞培养液。在通常情况下，H1299或293T细胞在感染后第3天可达到80%-90%的融合度。请根据目标细胞的实际生长速度，适当调整接种量，以确保感染后第3天细胞生长至预定融合度。

第2天：准备慢病毒颗粒并感染目标细胞

（1）首先计算所需的慢病毒颗粒量，从-80℃取出冻存的慢病毒颗粒，利用冰浴融化。

（2）然后从培养箱中取出细胞，在显微镜下观察细胞的生长状态及融合度。当细胞状态良好时，可开始实验：

• A. 小心吸去24孔板中的旧培养液，并加入新的完全培养液；
• B. 分别向细胞中加入计算好的慢病毒颗粒液，确保培养板平放在工作台上，用划8字的方式轻轻混匀；
• C. 混匀后，将细胞培养板置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养。

第3天：更换培养液

感染12-16小时后，吸出含慢病毒颗粒的培养液，并重新添加含5%灭活FBS（胎牛血清）的培养液，继续培养。请注意，目标细胞的感染时长可能需要调整，某些细胞的感染时间不应超过12小时。

第4天：观察细胞状态

持续观察细胞的状态，并确认是否有异常情况。

第5天：评估感染效率

使用70%乙醇清洁24孔培养板外壁，然后在倒置荧光显微镜下观察荧光反应，拍照并估计慢病毒颗粒对细胞的感染效率。如果慢病毒颗粒携带的基因表达所需时间较长，可建议观察72至96小时后再评估荧光表达。

通过观察荧光情况，可初步从MOI梯度中找出目标细胞的合适MOI值，以指导后续实验的优化。这些实验步骤结合[MILE米乐]的优化方案，将帮助研究者更高效地开展生物医学研究。