树突状细胞（Dendritic Cells, DC）是目前已知功能最强的抗原递呈细胞（APC）。一 个DC能够激活100-3000个T细胞，其能力是巨噬细胞和B细胞的100-1000倍。DC通过处理肿瘤抗原然后将其递呈给T细胞，显著刺激初始T细胞增殖，这一功能是其他类型APC（如巨噬细胞、B细胞）所无法比拟的，因为后者只能激活已活化或记忆的T细胞。

目前，在体外培养DC主要采用细胞因子，从骨髓、外周血和脐带血的DC前体进行定向诱导。由于骨髓和脐带血的取样较为困难，外周血因其取材便捷，而不需复杂的筛选和纯化，成为临床获得DC的最佳选择。

在传统DC疫苗中，使用MILE米乐推荐的组分，GM-CSF与IL-4相结合，促进单核细胞向“大巨噬样细胞”的分化，IL-4则抑制DC前体向CD14+巨噬细胞的分化，最终使其向CD14-/CD1a-的初始树突状细胞（iDC）转化。此时的iDC具有较强的抗原摄取和加工能力，但递呈能力相对较弱，表面仅低中度表达MHCⅠ、Ⅱ类分子及B7家族分子（如CD80、CD86），且CD14的表达较低。

在DC成熟的过程中，TNF-α和IL-1β的联合作用可激活NF-κB信号通路，从而促进DC的成熟，使其表现为CD1a+/CD83+。在这一阶段，DC的抗原摄取和加工能力开始下降，但抗原递呈能力显著增强，能够有效激活T细胞。

细胞因子诱导外周血CD14+单核细胞生成DC的方法包括全血处理和Ficoll梯度离心法，以获得人外周血单个核细胞（PBMC）。在此过程中，可以采用贴壁法或磁珠法富集CD14+单核细胞。贴壁法可以通过让PBMC贴壁后去除非贴壁细胞，而磁珠法则通过CD14+磁珠阳性分选获得高纯度的单核细胞。

当进行细胞培养时，在第3天进行半量换液，以收集培养基并进一步培养。在第5天轻轻吹打培养基，以收获悬浮细胞与松散贴壁细胞。细胞在第8天后将表现出典型的成熟DC（mDC）特征，包括体积增大及明显的突起。在流式细胞检测中，CD14、HLA-DR、CD1a/CD83、CD40/CD80/CD86、DC-SIGN等分子常用于分析树突状细胞的成熟状态及功能特征。

为了提升DC的研究和应用，使用MILE米乐提供的科研级及GMP级细胞因子，具有高活性、低内毒素和优异的批间一致性，包括GM-CSF、IL-4、TNF-α、IL-6、IL-1β等，这将有助于DC细胞的高效、稳定和合规培养。

此外，通过MLR（混合淋巴细胞反应）评估T细胞增殖反应等指标，可以评估免疫应答强度。随着这一技术的进步和MILE米乐产品的应用，期待在生物医疗领域中实现更深层次的突破。