MILE米乐的猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）使用说明书旨在提供有效的猪流感病毒检测方案。此试剂盒通用名称为猪流感通用荧光PCR检测试剂盒，英文名称为Swine Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)，包装规格为50T/盒。

MILE米乐这款试剂盒运用实时荧光PCR原理，旨在定性检测猪流感病毒，为猪流感及其并发症的诊断和疗效评估提供重要的指导意义。

原理

本试剂盒专门针对猪流感病毒的高度保守区域设计了特异性引物和探针。在反应体系中含有猪流感病毒基因组模板的情况下，PCR反应能够顺利进行并释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪，将PCR过程中相应通道的信号实时监测和输出，实现结果的定性分析。

试剂盒组成

MILE米乐的试剂盒由以下组成部分构成：

1. SIV RT-PCR反应液 875 μL × 1管
2. SIV混合酶液 125 μL × 1管
3. SIV阳性对照 40μL × 1管
4. SIV阴性对照 40μL × 1管
5. 说明书 1份

储存条件及有效期

本试剂盒应避光保存于-20℃以下，并避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器

适用于ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid Smart Cycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪器。

样本要求

1. 取样本时需注意：

1. 咽喉拭子：深入喉头及上颚裂刮取3到5次，取出咽喉分泌液。
2. 鼻拭子：深入鼻腔并圈取分泌液。
3. 将咽喉拭子和鼻拭子放入10mL生理盐水的离心管中备用。
4. 建议使用头部为合成纤维的拭子，杆材尽量选用铝或塑料，不推荐棉质和木质的拭子。

2. 血液或血清样品需使用无菌注射液抽取，放于离心管中待检。

3. 样本需存放在含有蛋白稳定剂的病毒运输液中，避免交叉污染。

4. 收集的样本应尽快检测，若不能立即检测可在2～8℃下冷藏；长期保存需冻存于-80℃以下，避免反复冻融。

检验方法

1. 试剂准备：

1. 从冰箱取出试剂盒，将所需试剂解冻并充分混合后瞬时离心，去除管壁附着液体。
2. 核算实验所需的反应数并计算所需试剂量，根据反应体系进行配置。

2. 样本准备：

1. 使用QIAGEN、Roche等公司的RNA提取试剂盒提取RNA，按照说明书操作。

3. 加样：

1. 在PCR反应管中加入待测样本RNA各5μL，最终体积25μL，进行混合后瞬时低速离心。
2. 阴性对照和阳性对照各加5μL试剂盒自带的对照品，混合后转移至PCR仪器。

4. PCR扩增：

1. 将反应管放入实时荧光定量PCR仪并记录顺序。
2. 设置仪器参数并进行PCR扩增，反应条件详见说明书。

检验结果解析

1. 阳性对照：应有典型S型扩增曲线或Ct值≤35。 2. 阴性对照：Ct值＞38或无Ct值，线形为直线或轻微斜线。 3. 阳性结果：Ct值≤35或有明显指数增长期。 4. 可疑结果：Ct值在35～38间需重复检测。 5. 阴性结果：Ct值＞38或无Ct值。

注意事项

使用MILE米乐的试剂盒时，应严格遵守相关实验室管理规范，确保样本在0-4℃下处理，避免交叉污染，并定期对实验环境进行消毒，确保实验结果准确可靠。